Teoriaa

Maidon proteiinipitoisuuden mittaamiseksi käytetään kompleksinmuodostusta, kuparipitoista reagenssia. Reagenssin kupari-ioni muodostaa proteiinimolekyylin päässä olevan aminoryhmän kanssa violetin yhdisteen (proteiini muodostuu aminohapoista, jotka ovat polymeroituneet peptidisidoksia muodostavan polykondensaation kautta; aminohapoissa on sekä karboksyyli- että aminoryhmä).

Liuoksien valmistus

Biuret-reagenssi: Liuota 6 g K-Na-tartraattia ja 1,5 g CuSO₄ x 5 H₂O n. 100 millilitraan vettä. Liuota 11 g NaOH:ia n. 100 millilitraan vettä. Yhdistä liuokset ja laimenna mitapullossa 250 ml tilavuuteen. Säilytä liuos pimeässä.

Standardiliuokset: Laimean vertaliliuoksen valmistus (proteiinia 200 mg/l): pipetoi 5 millilitraa proteiiniliuosta (proteiinia 8 g/l) 200 millilitran mittapulloon, jossa on 25 millilitraa biuret-reagenssia. Täytä mittapullo merkkiin asti vedellä.
Väkevän vertaliliuoksen valmistus (proteiinia 1000 mg/l): pipetoi 25 millilitraa proteiiniliuosta (proteiinia 8 g/l) 200 millilitran mittapulloon, jossa on 25 millilitraa biuret-reagenssia. Täytä mittapullo merkkiin asti vedellä.

Näyteliuos: Proteiiniliuos (8 g/l): Pipetoi 25 ml rasvatonta maitoa (proteiinia 3,3 g / 100 ml) 100 millilitran mittapulloon ja täytä mittapullo merkkiin asti vedellä. Kevytmaito ei käy, koska siinä tulee samentumaa. Pipetoi tutkittavaa maitoa 5 millilitraa 200 millilitran mittapulloon, jossa on 25 millilitraa biuret-reagenssia. Täytä mittapullo merkkiin asti vedellä.

Spektrofotometrinen mittaus

Määritetään sopiva aallonpituus spektrofotometriseen mittaukseen (violetin värinen liuos, sopiva aallonpituus 545 nm). Liuoksien - standardiliuokset ja näyteliuos - absorbanssit (voimakkuus) mitataan spektrofotometrillä em. sopivalla allonpituudella. .

Mittaa spektrofotometrillä liuosten absorbanssit 15 minuutin kuluttua liuosten valmistuksesta.