https://peda.net/id/3b38eee697c 2021-04-07T21:15:28+03:00 https://peda.net/:static/535/peda.net.logo.bg.svg <div class="license">Tämän sivun lisenssi <a rel="license" href="https://peda.net/info">Peda.net-yleislisenssi</a></div> https://peda.net/id/7856d4d897d 2021-04-07T21:45:48+03:00 <h3>Teoriaa</h3> <br/> Maidon proteiinipitoisuuden mittaamiseksi käytetään kompleksinmuodostusta, kuparipitoista reagenssia. Reagenssin kupari-ioni muodostaa proteiinimolekyylin päässä olevan aminoryhmän kanssa violetin yhdisteen (proteiini muodostuu aminohapoista, jotka ovat polymeroituneet peptidisidoksia muodostavan polykondensaation kautta; aminohapoissa on sekä karboksyyli- että aminoryhmä).<br/> <br/> <h3>Liuoksien valmistus</h3> <br/> <b>Biuret-reagenssi:</b> Liuota 6 g K-Na-tartraattia ja 1,5 g CuSO₄ x 5 H₂O n. 100 millilitraan vettä. Liuota 11 g NaOH:ia n. 100 millilitraan vettä. Yhdistä liuokset ja laimenna mitapullossa 250 ml tilavuuteen. Säilytä liuos pimeässä.<br/> <br/> <b>Standardiliuokset: </b>Laimean vertaliliuoksen valmistus (proteiinia 200 mg/l): pipetoi 5 millilitraa proteiiniliuosta (proteiinia 8 g/l) 200 millilitran mittapulloon, jossa on 25 millilitraa biuret-reagenssia. Täytä mittapullo merkkiin asti vedellä.<br/> Väkevän vertaliliuoksen valmistus (proteiinia 1000 mg/l): pipetoi 25 millilitraa proteiiniliuosta (proteiinia 8 g/l) 200 millilitran mittapulloon, jossa on 25 millilitraa biuret-reagenssia. Täytä mittapullo merkkiin asti vedellä.<br/> <br/> <b>Näyteliuos:</b> Proteiiniliuos (8 g/l): Pipetoi 25 ml rasvatonta maitoa (proteiinia 3,3 g / 100 ml) 100 millilitran mittapulloon ja täytä mittapullo merkkiin asti vedellä. Kevytmaito ei käy, koska siinä tulee samentumaa. Pipetoi tutkittavaa maitoa 5 millilitraa 200 millilitran mittapulloon, jossa on 25 millilitraa biuret-reagenssia. Täytä mittapullo merkkiin asti vedellä.<br/> <br/> <h3>Spektrofotometrinen mittaus</h3> <br/> Määritetään sopiva aallonpituus spektrofotometriseen mittaukseen (violetin värinen liuos, sopiva aallonpituus 545 nm). Liuoksien - standardiliuokset ja näyteliuos - absorbanssit (voimakkuus) mitataan spektrofotometrillä em. sopivalla allonpituudella. . <br/> <br/> Mittaa spektrofotometrillä liuosten absorbanssit 15 minuutin kuluttua liuosten valmistuksesta. 2021-04-07T21:45:48+03:00